RPMI-1640廣泛應用于哺乳動物、特殊造血細胞、正?;驉盒栽錾陌准毎?,雜交瘤細胞的培養(yǎng),是目前應用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。
流式細胞術(shù)(flowcytometry,F(xiàn)CM)是一種綜合應用光學、機械學、流體力學、電子計算機、細胞生物學、分子免疫學等學科技術(shù),使被測溶液流經(jīng)測量區(qū)域,并逐一檢測其中每一個細胞的物理和化學特性,從而對高速流動的細胞或亞細胞進行快速定量測定和分析的方法。
據(jù)研究表明,約98%的支原體存在于細胞表面和細胞間隙。支原體直徑約180~350nm,比細胞小很多,經(jīng)低速離心與細胞分離。通過反復懸浮沖洗、離心,加上使用我們的Zell Shield,即可在細胞培養(yǎng)四代以內(nèi)有效地祛除支原體。
醋酸鹽緩沖液(pH3.5)取醋酸銨25g,加水25ml溶解后,加7mol/L鹽酸溶液38ml,用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調(diào)節(jié)PH值至3.5(電位滴定法),用水稀釋至100ml,即得。
細胞凋亡通常稱為細胞程序性死亡,是由基因控制的主動性細胞死亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),細胞凋亡與多種疾病密切相關(guān),如癌細胞具有連續(xù)增殖、抵抗細胞凋亡能力,利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫瘤診斷,療效評價和預后預測提供了重要的參考指標。
分離質(zhì)粒 DNA 與提取 RNA 或基因組 DNA 的提取方式是不相同的,因為必須質(zhì)粒與基因組 DNA 必須分離。如果此刻,您加入離液劑將立即釋放所有物質(zhì),并且無法將小環(huán)狀 DNA 與高分子量染色體區(qū)別開來。因此,在質(zhì)粒制備過程中中,直到裂解后才加入離液劑,鹽用于結(jié)合。
酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結(jié)構(gòu)不同可采用不同的方法。對于制備HRP結(jié)合物,可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。
本實驗用簡易過碘酸鈉法進行HRP標記抗體。本法是以NaIO4先將HRP表面的糖分子氧化成醛基,然后再與Ig上的氨基相結(jié)合,所獲酶標記抗體的產(chǎn)率高,將近70%的HRP和Ig結(jié)合,99%的Ig與酶結(jié)合,酶與Ig的活性無重大損失,是目前最常用的方法。